مرق السيلينيت هو وسيلة تخصيب ذات خصائص انتقائية مصممة للعزل البكتيريا المسببة للأمراضجنس السالمونيلا (lat. السالمونيلا). إنه فعال للغاية عندما يكون من الضروري اكتشاف هذا الكائن الممرض بين الممثلين الآخرين للبكتيريا المعوية. يتم استخدام الوسيط للتشخيص السريري وللأغراض الصحية أثناء الاختبار منتجات الطعام.
الخصائص العامة
يتم تحضير مرق السيلينيت على أساس المسحوق، وهو عبارة عن خليط متجانس من مكونات مختلفة للتركيبة. قد يكون لون المادة الجافة أصفر فاتح أو كريمي، حسب نوع الوسط. المسحوق له خصائص التدفق الحر.
مرق السيلينيت النهائي عبارة عن وسط سائل شفاف ذو لون أصفر فاتح. تُسكب هذه الكتلة في حاويات يتم فيها البذر لمزيد من الحضانة.
هناك ثلاثة أنواع رئيسية من مرق السيلينيت:
- وسط في شكله النقي - مناسب لعزل السالمونيلا من المواد السريرية والصحية؛
- مع إضافة مانيتول (مرق ثنائي المكونات) - مخصص للعمل فقط مع المواد السريرية؛
- وسط السيستين السيلينيت - يمكن استخدامه لعزل السالمونيلا من المادة الحيوية المرضية للمريض (البراز، البول، إلخ).
تختلف هذه الأنواع قليلاً في تكوين مكوناتها وخصائص عملها.
تتمثل المهمة الرئيسية لمرق السيلينيت في تعزيز تراكم السالمونيلا، وقمع نمو البكتيريا المصاحبة. وهذا يجعل من الممكن ليس فقط اكتشاف العامل الممرض في المادة، ولكن أيضًا نقله لاحقًا إلى الأجار. تم تطوير الوسيط بواسطة ليفلر، الذي كان أول من اكتشف التأثير الانتقائي للسيلينيت ضد السالمونيلا.
مُجَمَّع
يحتوي مرق السيلينيت على:
- هيدروليزات الكازين.
- اللاكتوز.
- فوسفات الصوديوم؛
- هيدروسيلينيت الصوديوم.
يحتوي وسط السيلينيت-سيستين، بالإضافة إلى هذه المكونات، على إل-سيستين وفوسفات هيدروجين الصوديوم. يختلف تكوين المرق مع المانيتول لأنه بدلاً من الكازين هيدروليزات فإنه يحتوي على هضم هضمي من الأنسجة الحيوانية. لا يوجد اللاكتوز في مثل هذه البيئة، ولكن هناك مانيتول. يعمل الأخير كركيزة قابلة للتخمير ويوفر خصائص التخزين المؤقت للمرق.
جميع مكونات المسحوق، باستثناء هيدروسيلينيت الصوديوم، تسمى تقليديًا الجزء أ، وتسمى المادة الانتقائية الجزء ب.
مبدأ التشغيل وخصائص الوسط
يعمل مرق السيلينيت كوسيلة تخزين انتقائية. ويتم ضمان التأثير الانتقائي من خلال سمية السيلينيت، التي تمنع نمو معظم الكائنات الحية الدقيقة. وفي الوقت نفسه، فإن بكتيريا جنس السالمونيلا قادرة على استعادة هذا المركب، وبالتالي القضاء على التأثير السام لخلاياها. ومع ذلك، نتيجة للتفاعل، يتم تشكيل القلويات، مما يقلل من التأثير الضار للسيلينيت على نمو النباتات الدقيقة المصاحبة، وبالتالي هناك حاجة لتحقيق الاستقرار في درجة الحموضة. يتم تنفيذ هذه الوظيفة عن طريق البكتيريا التي تخمر اللاكتوز لإنتاج الحمض. يتم توفير التخزين المؤقت للوسط بواسطة الفوسفات.
في المرق المكون من مكونين، يتم تثبيت الرقم الهيدروجيني بواسطة المانيتول. تعمل الوسائط التي تحتوي على السيستين على تحسين العمل الانتقائي ضد السالمونيلا. هذا المرق فعال في السيطرة على الخلفية المعدية لدى المرضى الذين يعانون من مرحلة غير حادة من المرض أو في مرحلة النقاهة.
يمكن ملاحظة ظهور خصائص النمو للسلالات المرجعية في الوسط بعد 12-24 ساعة من بداية الحضانة. في هذه الحالة، تشكل السالمونيلا مستعمرات عديمة اللون.
ميزات الطبخ
يتم تحضير الوسط على مرحلتين. أولاً، قم بعمل محلول بمكون انتقائي بمعدل 4 جرام من سيلينيت الصوديوم لكل لتر من الماء المقطر. ثم أضف 19 جرامًا من مسحوق الأساس (الجزء أ). يتم خلط المحلول جيدًا وتسخينه حتى تذوب الجزيئات تمامًا، وبعد ذلك يتم سكبها في أنابيب اختبار معقمة.
عند الطهي، من المهم مراقبة ذلك ظروف درجة الحرارة، لأن البيئة غير مستقرة لارتفاع درجة الحرارة. لا يمكن تعقيم المرق إلا في حمام مائي أو باستخدام تيار من البخار. التعقيم للوسط ممنوع منعا باتا.
مرق عزل المكورات المعوية (مرق المكورات المعوية) هو وسيلة تخصيب لعزل المكورات المعوية من العينات التي تحتوي على العديد من النباتات الدقيقة المصاحبة. يتم تثبيط العديد من الكائنات الحية الدقيقة، مثل النيسرية الرمية، والمكورات العنقودية، والمستدمية، والمكورات العقدية غير الحالة للدم، وبعض البكتيريا المعوية، كليًا أو جزئيًا.
الكازين وببتونات الصويا هي مصادر العناصر الغذائية الضرورية لنمو الكائنات الحية الدقيقة. الدكستروز هو كربوهيدرات متخمرة، وهو مصدر للكربون والطاقة. يحافظ كلوريد الصوديوم على التوازن الأسموزي. سترات الصوديوم مصدر إضافي للكربون. أزيد الصوديوم هو المانع. كبريتيت الصوديوم، عند اختزاله، يشكل H2S. يقلل L-cystine من احتمالية الأكسدة والاختزال عن طريق إزالة الأكسجين، والحفاظ على قيمة Eh منخفضة. البنفسجي البلوري هو مؤشر الرقم الهيدروجيني.
التلقيح والحضانة لمدة 18-24 ساعة عند 35 درجة مئوية في جو عادي. يتم تحديد نمو المكورات المعوية من خلال تكوين رواسب حبيبية في الجزء السفلي من أنبوب الاختبار، ويكون السائل فوقها بدون رواسب أو غائم قليلاً. في هذه المرحلة، يتم إجراء تلوين جرام وإجراء خط على صفائح الدم (Trypticasein Soy Agar (Cat. رقم 1068) أو Blood Agar Base (Cat. No. 1108)) لتحديد نوع انحلال الدم وعزل الثقافات النقية. للتمييز بين المكورات العقدية والمكورات الرئوية، ضع أقراص الباسيتراسين والأبتوشين على المنطقة الملقحة على ألواح أجار الدم واحتضنها في ظل الظروف الموصى بها لمدة 18-24 ساعة عند درجة حرارة 35 ± 2 درجة مئوية.
إجراء وصمة عار غرام، واختبار الكاتالاز، واختبار الذوبان في الصفراء على المستعمرات التمثيلية المأخوذة من لوحات أجار الدم أو ثقافة المرق.
إن وجود سلاسل من المكورات موجبة الجرام ذات أطوال متغيرة، والتي يتم تثبيتها بواسطة تركيزات منخفضة من الباسيتراسين، السالبة للكاتالاز، وغير القابلة للذوبان في الأملاح الصفراوية أو الصفراوية، هو تعريف أولي للمكورات العقدية الحالة للدم بيتا من المجموعة أ. يتم تحقيقه باستخدام اختبارات كيميائية حيوية أخرى مثل التحلل المائي للإسكولين والتحلل المائي للبيروفات وما إلى ذلك. بالإضافة إلى ذلك، يمكن إجراء الكتابة المصلية باستخدام طرق Lancefield antiserum أو طرق التخثر التقليدية لإدواردز ولارسون.
اختبار ميكروبيولوجي
تم الحصول على النتائج التالية باستخدام الوسط في ثقافات الاختبار بعد الحضانة عند 35 ± 2 درجة مئوية وتم ملاحظتها بعد 18-24 ساعة.
|
الكائنات الدقيقة |
|
|
الإشريكية القولونية ATCC 25922 |
تثبط |
|
المكورات المعوية البرازية ATCC 19433 |
|
|
المكورات المعوية البرازية ATCC 27270 |
قاعدة مرق بولتون الانتقائية -
بولتونمرق التخصيب الانتقائي (قاعدة) لعلم الأحياء الدقيقة
قطة. رقم 1.00068.0500
التعبئة والتغليف - 500 جم
مرق تخصيب بولتون انتقائي للكشفكامبيلوباكتر
مبدأ التشغيل
يحتوي Bolton Selective Broth على العناصر الغذائية التي تساعد في التعرف على خلايا Campylobacter حتى التالفة. ليس من الضروري إنشاء ظروف ميكروأيروفيلية. إن إدخال مادة مضافة انتقائية في الوسط يمنع نمو البكتيريا المصاحبة إيجابية الجرام وسالبة الجرام.
التركيب (جم/لتر)
ببتون اللحوم 10.0؛ لاكتالبومين هيدروليزات 5.0؛ خلاصة الخميرة 5.0؛ كلوريد الصوديوم 5.0؛ حمض كيتوجلوتاريك 1.0؛ بيروفات الصوديوم 0.5؛ ثنائي كبريتيت الصوديوم 0.5؛ كربونات الصوديوم 0.6؛ هيمين 0.01.
تحضير
قم بإذابة 13.8 جم في 500 مل من الماء المقطر. الأوتوكلاف لمدة 15 دقيقة عند 121 درجة مئوية ثم يبرد إلى 45 درجة مئوية. أضف بشكل معقم 25 مل من دم الحصان المتحلل ومحتويات زجاجة واحدة من المكملات الانتقائية بولتون مرق انتقائي ملحق (قطة.ن 1.00079.0001) إلى مرق بولتون. تخلط جيدا وتصب المرق في زجاجات معقمة بأغطية لولبية. بعد إضافة العينة، ينبغي أن يكون هناك حوالي 2 سم من الخلوص بين الغطاء اللولبي ومستوى المرق.
الرقم الهيدروجيني 7.4 ±0.2 عند 25 درجة مئوية.
الوسط المحضر في القارورة أحمر داكن أو أسود اللون تقريبًا.
إجراء التحليل
امزج 25 جم من العينة في 225 مل من مرق بولتون الانتقائي واحضنها لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
ثم يستمر الحضانة عند درجة حرارة 41.5 درجة مئوية لمدة 14-44 ساعة.
تمت الزراعة الفرعية بعد 18 ساعة و48 ساعة، على التوالي، على الآجار الانتقائي الخالي من الدم Campylobacter (Cat. رقم 1.00070.0500)، والذي لا يحتوي على دم.
الفحص المباشر ل العطيفة الصائميةو جأولييتم تنفيذها باستخدام الاختبارات السريعة Singlepath® كامبيلوباكتر(القطة رقم 1.04143.0001).
رقابة جودة.
أصحاب براءة الاختراع RU 2553224:
وتتعلق مجموعة الاختراعات بالتكنولوجيا الحيوية. تحتوي متغيرات الوسط المغذي للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية على هيدروليزات البنكرياس من دقيق السمك، أو ببتون اللحوم، أو هيدروليزات البنكرياس من دقيق السمك وببتون اللحوم (بنسبة 1: 1)، والصفراء المعدلة المنقى (PBM)، وكلوريد الصوديوم، والجلوكوز. ، فوسفات البوتاسيوم أحادي الاستبدال وأخضر لامع بنسبة معينة. تتيح الاختراعات زيادة كفاءة تراكم البكتيريا المعوية والخصائص الانتقائية للوسط وتبسيط طريقة الحصول على وسط غذائي. 3 ن. ملفات، 3 جداول، 9 صفحات.
يتعلق الاختراع بعلم الأحياء الدقيقة الصحي والسريري ويمكن استخدامه للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية من الماء والمنتجات الغذائية والمواد السريرية وما إلى ذلك.
الشركات الأجنبية الرائدة: ميرك "علم الأحياء الدقيقة"، 2004-2005، ص 202؛ تاريخ اللحوم. يتم عرض محتوى المكونات بالجرام / لتر في الجدول 1.
للمكافحة البكتريولوجية وفقا لدستور الأدوية الحكومي الاتحاد الروسي، الإصدار الثاني عشر، الذي ينظم قائمة الوسائط المغذية للإثراء الانتقائي للبكتيريا المعوية، يوفر مرق موسيل (Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel) OFS 42-0067-07.
يرجع التراكم الانتقائي لجميع أنواع البكتيريا المعوية في مرق موسيل إلى حقيقة أن التركيز العالي من الصفراء الثور مع اللون الأخضر اللامع يمنع نمو البكتيريا المصاحبة، والجلوكوز يعزز نمو البكتيريا المعوية. يوفر فوسفات الصوديوم والبوتاسيوم قدرة عازلة كبيرة في الوسط، مما يحمي الثقافة من الآثار الضارة للحمض الناتج.
حتى الآن، في روسيا، نظرًا لعدم وجود وسيلة مغذيات جافة تجارية محلية للإثراء الانتقائي للبكتيريا المعوية في ممارسة علم الأحياء الدقيقة السريري والصحي، يتم استخدام مرق موسيل المحضر مختبريًا، وللتحكم في النقاء الميكروبيولوجي للوسائط الطبية - الوسط رقم 3 (وسط تخصيب للبكتيريا من عائلة Enterobacteriaceae).
عيوب مرق الموسيل المصنع معمليا حسب الوصفة المقدمة في الصندوق العالمي الطبعة الثانية عشرة والوسيلة رقم 3 هي:
صعوبة التحضير
استخدام الصفراء غير النقية للماشية كعامل انتقائي - وهي مادة ذات تركيب كيميائي غير مؤكد مما يجعل من الصعب الحصول على نتائج موضوعية؛
عدم وجود مستحضرات جافة محلية الصنع - الببتون والصفراء، والتي تتمتع بدرجة عالية من الشفافية في المحاليل؛
ضرورة الترشيح في حالة استخدام المكونات الرئيسية للوسط المنتج محلياً، كخطوة إضافية في عملية التحضير؛
ضعف القدرة المثبطة ضد مرافقة الميكروبات إيجابية الجرام مع ضمان نمو البكتيريا المعوية.
زيادة تكلفة البيئة إذا كان من الضروري استخدام الأدوية المستوردة.
الأقرب إلى مرق موسيل المقترح هو مرق موسيل التجاري (ميرك)، والذي يتكون من المكونات التالية، جرام/لتر:
عيب البيئة التجارية (ميرك) هو:
عدم كفاية الكفاءة في النمو والتراكم الانتقائي لعدد من البكتيريا المعوية.
خصائص مثبطة غير واضحة ضد الميكروبات المرتبطة بها.
توافر محدود.
الهدف من الاختراع هو إنشاء وسط غذائي جاف محلي للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية، وهو أكثر كفاءة، مع خصائص انتقائية أعلى، مما يضمن إمكانية الوصول والحصول على نتائج موضوعية للتحكم البكتريولوجي.
تم حل المشكلة من خلال اقتراح وسط غذائي جاف للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية، يحتوي على قاعدة بروتينية، جلوكوز، فوسفات البوتاسيوم أحادي البديل والأخضر اللامع، وكقاعدة بروتينية تحتوي على هيدروليزات البنكرياس من مسحوق السمك، أو ببتون اللحم. ، أو هيدروليزات البنكرياس من مسحوق السمك وببتون اللحوم (بنسبة 1: 1)، والصفراء المعدلة المنقى (PBM) وكلوريد الصوديوم في النسبة الكمية التالية للمكونات، جم / لتر:
خيار واحد:
الخيار الثاني:
الخيار الثالث:
يتم تحقيق النتيجة الفنية من خلال التحضير الأولي للصفراء الخام. لهذا الغرض، يتم غلي العصارة الصفراوية للماشية الأصلية وتصفيتها من خلال قطعة قماش مرشحة (سيور) عند نقاط تساوي الجهد الكهربي، عند كل قيمة أس هيدروجيني، من أجل ترسيب البروتينات والببتيدات عالية الجزيئية. المرحلة النهائيةيتكون تحضير الصفراء من امتزاز الشوائب بواسطة الكربون النشط، وإضافة الكمية المحسوبة من فوسفات الصوديوم غير المستبدل من حيث محتوى المادة الجافة والغليان والترشيح. وهذا يلغي إضافة فوسفات الصوديوم إلى الوسط، مما يضمن قدرة عازلة عالية للوسط النهائي وشفافيته. إن توازن التركيبة المكونة للوسط، بما في ذلك وجبة السمك المتحللة بنكرياسية (PGHM)، كقاعدة مغذية للبروتين، يضمن نموًا جيدًا وخصائص انتقائية لمرق موسيل.
تتضمن طريقة إنتاج مرق موسيل خلط المكونات الجافة، جم/لتر:
يوفر هيدروليزات البنكرياس من وجبة السمك أو ببتون اللحم احتياجات نمو الكائنات الحية الدقيقة لتغذية النيتروجين. يتيح التحضير الأولي لعصارة الماشية إمكانية الحصول على الصفراء الجافة المعدلة المنقى (PBM)، والتي توفر قدرة عازلة عالية وشفافية للوسط المغذي النهائي، وخصائص مثبطة ضد النباتات البكتيرية المصاحبة غير المرغوب فيها والتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية، والتي لا يتم تثبيطها كعامل مساعد. نتيجة لتكوين النفايات الحمضية.
الفرق بين الوسط المقترح والنموذج الأولي هو إمكانية استخدام، إلى جانب الببتون اللحمي، وهيدروليزيت البنكرياس من وجبة السمك كقاعدة بروتينية. إن تقنية تحضير الصفراء الخام باستخدام فوسفات الصوديوم غير المستبدل تقضي على إضافتها الإضافية إلى الوسط. تضمن النسبة الكمية لمكونات الوسط المغذي، ودرجة الحموضة، أن يحافظ الوسط على خصائص نمو جيدة، وكفاءة تراكم البكتيريا المعوية والتأثير المثبط على النباتات الدقيقة المصاحبة. تظل الوسيلة المعدة معقمة لمدة 10 أيام على الأقل
لتحقيق نتيجة فنية في مرحلة إنتاج الصفراء المعدلة المنقى (PBM)، الصفراء بعد ترسيب البروتينات عند نقاط تساوي الجهد الكهربي، امتزاز الشوائب بالكربون النشط مع إضافة فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة بمعدل 12.0 جم لكل 20.0 جم من الصفراء، من حيث المادة الجافة، يتم تجفيفها في وحدة تجفيف في طبقة مميعة تهتز A1-FMU.
مثال 1. لتحضير الوسط حسب الخيار الأول، خذ حصصًا موزونة من المكونات التالية، جرام/لتر:
يضمن الوسط المقترح، الشفاف والأخضر، نمو وتراكم سلالات الاختبار التالية لعائلة Enterobacteriaceae عند تلقيحها بـ 0.5 مل من المعلق الميكروبي من تخفيف 10 -7:
الإشريكية القولونية O55:K59 3912/41
إس. فليكسنيري 1 أ 8516
س. تيفيموريوم 79
ك. الالتهاب الرئوي 418
ك. الالتهاب الرئوي 3534/51
الوسيلة المقترحة تمنع بشكل كبير نمو الكائنات الحية الدقيقة إيجابية الجرام، ولا سيما S. aureus Wood-46، من التخفيف 10 -1.
تم الحصول على سلالات اختبار الكائنات الحية الدقيقة المستخدمة للتحكم في البيئة من قسم ثقافات التجميع بمعهد الموازنة الفيدرالية للعلوم التابع للمركز العلمي الحكومي للطب والبيولوجيا.
إعداد تعليق الثقافة القياسية لكل سلالة اختبار، الموافق 10 وحدات من عينة التعكر القياسية OSO 42-28-85 P، باستخدام محلول كلوريد الصوديوم المعقم 0.9٪. يتم تخفيف المعلقات الاستزراعية الناتجة عشرة أضعاف (4.5 مل من محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ مع 0.5 مل من المعلق الميكروبي) ويتم تخفيفها إلى 10 -7 (بالنسبة لـ S. aureus Wood-46 - إلى تخفيف 10 -1) واستخدامها لبيئة التحكم.
لتحديد خصائص النمو، يتم إجراء التلقيح باستخدام 0.5 مل من المعلق الميكروبي لكل سلالة اختبار من تخفيف 10-7 في 5.0 مل من مرق موسيل، أي. 10 ميكرومتر/مل وسط. تم تحضين المحاصيل عند درجة حرارة (37±1) درجة مئوية لمدة 20-24 ساعة، ويبين الجدول 2 نتائج المكافحة البيولوجية للعينات المعملية لمرق الموسيل على مجموعة من سلالات الاختبار.
مثال 2. تم إعداد الوسيط وفقًا للمثال 1.
مثال 3. تم إعداد الوسيط وفقًا للمثال 1.
يتم عرض نتائج المكافحة البيولوجية في الجدول 2 وهي مماثلة لنتائج الاختبار في المثال 1.
مثال 4. لتحضير مرق موسيل وفقًا للخيار الثاني، خذ حصصًا موزونة من المكونات التالية، جرام/لتر:
يتم تقليب العينات في 1 لتر من الماء المقطر، ثم تصب في أنابيب اختبار سعة 5 مل ويتم تعقيمها بواسطة جهاز التعقيم عند درجة حرارة 121 مئوية لمدة 5 دقائق.
مثال 5. تم إعداد الوسيط وفقًا للمثال 4.
نتائج المكافحة البيولوجية معروضة في الجدول رقم 3 وهي مشابهة لنتائج اختبارات الأمثلة 1، 2، 3 حسب الخيار 1.
مثال 6. لتحضير مرق بلح البحر وفقًا للخيار الثالث، خذ حصصًا موزونة من المكونات التالية، جرام/لتر:
يتم تقليب العينات في 1 لتر من الماء المقطر، ثم تصب في أنابيب اختبار سعة 5 مل ويتم تعقيمها بواسطة جهاز التعقيم عند درجة حرارة 121 مئوية لمدة 5 دقائق.
نتائج المكافحة البيولوجية لمرق الموسيل وفقا للخيار 3 معروضة في الجدول 3 وهي مماثلة لنتائج الاختبار في الأمثلة 1، 2، 3.
مثال 7. تم إعداد الوسيط وفقًا للمثال 6.
وترد نتائج المكافحة البيولوجية في الجدول 3 وهي مماثلة لنتائج الاختبار في الأمثلة 1، 2، 3.
مثال 8. تم إعداد الوسيط وفقًا للمثال 1.
وترد نتائج المكافحة البيولوجية في الجدول 2.
تقييم جودة الوسط المقترح للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية مع انتهاك النسبة الكمية للمكونات:
مثال 9. تم إعداد الوسيط وفقًا للمثال 1.
يتم عرض نتائج المكافحة البيولوجية في الجدول 2. يؤدي انتهاك النسبة الكمية لمكونات الوسط في الأمثلة 8، 9 إلى تدهور في النمو والخواص المثبطة، ونتيجة لذلك، انخفاض في معامل كفاءة الوسيط. تراكم البكتيريا المعوية.
من جداول الخصائص المقارنة للمكافحة البيولوجية (الجداول 2، 3) يتضح أن الوسط المغذي المقترح وفقا للأمثلة 1-7 له خصائص نمو جيدة، وهو فعال في تراكم البكتيريا المعوية ويمنع نمو المكورات العنقودية.
أظهر التسجيل المرئي لنتائج تراكم البكتيريا المعوية في نهاية فترة حضانة المحاصيل نتائج متطابقة في وسائط الاختبار والسيطرة.
إن التغير في النسبة الكمية لمكونات البيئة يؤدي إلى مخالفة المؤشرات البيولوجية لجودة البيئة المقترحة.
وهكذا، في حالة تحضير الوسط وفقًا للأمثلة 8، 9، لوحظ انخفاض في كفاءة تراكم البكتيريا المعوية والتأثير المثبط للوسط ضد S. aureus Wood-46.
للحصول على بيانات حول فعالية مرق الموسيل، تم تحضين الأنابيب الملقحة من كل سلالة اختبار تحتوي على حوالي 10 مك/مل - (التلقيح صفر) عند درجة حرارة (37±1) درجة مئوية لمدة 3 ساعات.لتحديد جرعة اللقاح 0 تم زرع 1 مل من المعلق الميكروبي لكل سلالة اختبار من تخفيف 10-7 على أطباق بتري مع أجار GRM. بعد حضانة المحاصيل في الوسط التراكمي، تم خلط محتويات الأنابيب وتم إجراء عملية بذر مماثلة على أجار GRM.
بعد 18-20 ساعة من حضانة المحاصيل على أجار GRM عند درجة حرارة (37±1) درجة مئوية، تم حساب المستعمرات المتكونة. تم حساب مؤشر الكفاءة من خلال زيادة عدد المستعمرات بعد حضانة المزرعة في وسط تراكمي إلى عدد المستعمرات التي لم يتم تلقيحها.
يتم عرض الخصائص المقارنة لفعالية مرق موسيل حسب الخيار 1 في الجدول 3. إن نتائج كفاءة تراكم البكتيريا المعوية في مرق موسيل المحضرة وفقًا للخيار 2 متشابهة وقابلة للمقارنة مع النتائج التي تم الحصول عليها عند اختبار مرق موسيل ، الخيار 1.
وهكذا، تم تطوير وسط غذائي جاف تنافسي محلي للإثراء الانتقائي للبكتيريا المعوية، والذي يتمتع بعدد من المزايا:
كفاءة تراكم البكتيريا المعوية أعلى بمقدار 1.5-2.0 مرة مما كانت عليه في البيئة التجارية.
معامل التثبيط ضد المكورات العنقودية أعلى بأكثر من 100 مرة من معامل التخصيب التجاري.
الوسط المغذي سهل التحضير؛
تم تطوير تقنية لتصفية الصفراء عند نقاط تساوي الجهد الكهربي باستخدام الكربون النشط وفوسفات الصوديوم غير المستبدل، مما يلغي إضافتها الإضافية إلى الوسط المغذي ويضمن شفافية المنتج النهائي؛
يتم التخلص من الحاجة إلى استخدام فوسفات الصوديوم اللامائي في صناعة المستحضر الجاف؛
إمكانية استخدام هيدروليزات البنكرياس من مسحوق السمك مع ببتون اللحم مع الحفاظ على النمو والخصائص الانتقائية؛
| الجدول 1 | |||||
| مرق تراكمي للبكتيريا المعوية حسب موسيل | |||||
| لا. | اسم المكونات | EO موسيل مرق EE مرق، موسيل HiMedia | مرق البكتيريا المعوية المخصب وفقًا لشركة Mossel LLC "GEM" | مرق موسيل لإثراء البكتيريا المعوية (Enterobacteria Erichment Broth-Mossel OFS 42-0067-07) | |
| 1 | البنكرياس تحلل الجيلاتين | - | - | 10,0 | 10,0 |
| 2 | ببتون لحم | 10,0 | 10,0 | - | - |
| 3 | مونوهيدرات الجلوكوز | 5,5 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
| 4 | الصفراء الثور | 20,0 | 20,0 | 20,0 | 20,0 |
| 5 | فوسفات الصوديوم غير بديل | 8,0 | 6,45 | 7,0 | 8,0 |
| 6 | فوسفات البوتاسيوم أحادي الاستبدال | 2,0 | 2,0 | 3,0 | 2,0 |
| 7 | الماس الأخضر | 0,015 | 0,0135 | 0,015 | 0,015 |
| الرقم الهيدروجيني للوسط المحضر | 7.2±0.2 | 7.2±0.2 | 7.2±0.2 | 7.2±0.2 |
| الجدول 2 | ||||||||
| الخصائص المقارنة للمكافحة البيولوجية لمرق الموسيل المعتمد على هيدروليزات البنكرياس لمسحوق السمك جرام/لتر | ||||||||
| لا. | اسم سلالة الاختبار | تربية | الخيار 1 | الخيار 1 | الخيار 1 | الخيار 1 | الخيار 1 | مرق التخصيب بلح البحر للبكتيريا المعوية (مرق موسيل) ميرك |
| مثال 1 | مثال 2 | مثال 3 | مثال 8 | مثال 9 | ||||
| 1 | الإشريكية القولونية 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 2 | الإشريكية القولونية 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ الرواسب |
| 3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| 3 | S. فليكسنيري لا 8516 | 10 -7 | ++ | ++ | ++ | + | + | ++ |
| 10 -6 | ++ | ++ | ++ | ++ | + | +++ | ||
| 4 | س. تيفيموريوم 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ | ||
| 5 | ك. الالتهاب الرئوي | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 418 | 10- 6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ الغاز | |
| 6 | S. aureus-Wood-46 | 10 -1 | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | + تعكر ضعيف منتشر للوسط | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | |
| الجدول 3 | |||||||
| الخصائص المقارنة للمكافحة البيولوجية لمرق موسيل المعتمد على ببتون اللحم وخليط PGRM مع ببتون اللحم بنسبة 1:1 جم/لتر | |||||||
| لا. | اسم سلالة الاختبار | تربية | الخيار 2 | الخيار 2 | الخيار 3 | الخيار 3 | مرق التخصيب بلح البحر للبكتيريا المعوية (مرق موسيل) ميرك |
| مثال 4 | مثال 5 | مثال 6 | مثال 7 | ||||
| 1 | الإشريكية القولونية 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 2 | الإشريكية القولونية 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ الرواسب |
| 3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| 3 | S. فليكسنيري لا 8516 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 4 | س. تيفيموريوم 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 5 | ك. الالتهاب الرئوي | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 418 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++غاز | |
| 6 | S. aureus-Wood-46 | 10 -1 | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | لا يوجد تعكر منتشر للوسط | لا يوجد تعكر منتشر للوسط |
| *+++ - نمو ممتاز مع تعكر منتشر للوسط؛ ++ - نمو جيد مع تعكر منتشر في الوسط؛ |
1. وسط مغذي للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية، جاف (مرق الموسيل)، يحتوي على قاعدة بروتينية، جلوكوز، فوسفات البوتاسيوم أحادي الاستبدال، أخضر لامع، يتميز بأنه يحتوي على هيدروليزات البنكرياس من مسحوق السمك كقاعدة بروتينية، بالإضافة إلى احتوائه على معدل منقى الصفراء (PBM) وكلوريد الصوديوم في النسبة الكمية التالية للمكونات، جم / لتر:
2. وسط غذائي للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية، جاف (مرق الموسيل)، يحتوي على ببتون اللحم، الجلوكوز، فوسفات البوتاسيوم أحادي الاستبدال والأخضر اللامع، يتميز بأنه يحتوي على الصفراء المعدلة المنقى (PBM) وكلوريد الصوديوم في النسبة الكمية التالية من المكونات ز / لتر:
3. وسط غذائي للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية، جاف (مرق الموسيل)، يحتوي على قاعدة بروتينية، جلوكوز، فوسفات البوتاسيوم أحادي البديل والأخضر اللامع، يتميز بأن قاعدة البروتين تحتوي على هيدروليزات البنكرياس من مسحوق السمك وببتون اللحم في 1: 1، بالإضافة إلى ذلك يحتوي على الصفراء المعدلة المنقى (PBM) وكلوريد الصوديوم في النسبة الكمية التالية للمكونات، جم / لتر:
براءات الاختراع المماثلة:
يتعلق الاختراع بمجموعة من البادئات والمسبارات قليل النوكليوتيد لتحديد وتصنيف الحمض النووي للبكتيريا Pasteurella multocida الأنماط المصلية A، B، D، E، F بواسطة PCR في الوقت الحقيقي.
يتعلق الاختراع بمجموعة من مجسات قليل النوكليوتيد ذات العلامات الفلورية لكتابة سلالات Burkholderia mallei. تحتوي المجسات المضمنة في المجموعة على هيكل دبوس الشعر مع فلوروفور ومخمد مضان في الأطراف وهي مكملة لمنتجات تفاعل التضخيم مع الاشعال.
يتعلق الاختراع بعلم الأحياء الدقيقة الغذائي، ولا سيما إنتاج وسط غذائي لتحديد الكائنات الحية الدقيقة التي تنتج الليباز في منتجات الحلويات.
يتعلق الاختراع بالطب ويمكن استخدامه لتحديد الكائنات الحية الدقيقة المنتجة لليورياز، وخاصة هيليكوباكتر بيلوري. وللقيام بذلك، يتم إجراء تحليل سريع على الأقراص التشخيصية لتحديد نشاط اليورياز في العينات.
وتتعلق مجموعة الاختراعات بالكيمياء الحيوية. طريقة الحصول على عينة قياسية من تعكر المعلقات البكتيرية، عينة قياسية من تعكر المعلقات البكتيرية، استخدام عينة قياسية من تعكر المعلقات البكتيرية، وكذلك مجموعة تحتوي على عينة قياسية من تعكر المعلقات البكتيرية يقترح المعلقات البكتيرية.
يتم عرض مجموعات من مجسات قليل النوكليوتيد والبادئات، ورقاقة بيولوجية دقيقة ونظام اختبار لتحديد وكتابة فيروسات الأنفلونزا A وB. يحتوي نظام الاختبار المميز على: مجموعة من الكواشف لعزل الحمض النووي الريبي (RNA) لفيروس الأنفلونزا عن المواد البيولوجية البشرية؛ مجموعة من الكواشف لتنفيذ تضخيم PCR مقترنة بالنسخ العكسي لتشكيل أجزاء تحمل علامات الفلورسنت من جينوم فيروس الأنفلونزا، تحتوي على بادئات قليل النوكليوتيد الموصوفة؛ مجموعة من الكواشف لتهجين أجزاء الحمض النووي التي تم الحصول عليها بعد التضخيم على شريحة حيوية تحتوي على عناصر مع تحقيقات قليل النوكليوتيد الموصوفة والمثبتة؛ وإذا لزم الأمر، الضوابط السلبية والإيجابية.
يتعلق الاختراع بالتكنولوجيا الحيوية، ولا سيما تحديد محتوى الكائنات الحية الدقيقة في مختلف الأشياء والبيئات. تتضمن الطريقة اقتران البكتيريا بملصق كهروكيميائي، وهو Fe0 أو MgFe2O4 أو Fe3O4، ويتم تنفيذه في بيئة مائية تحت معايير محددة.
يتعلق الاختراع بمجال علم الأحياء الدقيقة الطبية والتكنولوجيا الحيوية، ولا سيما علم الأحياء الدقيقة التشخيص المختبريأمراض معدية. يحتوي الوسط المغذي على التريبتون، ومستخلص الخميرة، والجلوكوز، وكلوريد الصوديوم، وكريات الدم الحمراء البشرية 0(I) مجموعة Rh(+)، وكبريتات الحديد(II)، وأجار ديفكو والماء المقطر بنسب محددة من المكونات.
يتعلق الاختراع بالتكنولوجيا الحيوية ويمكن استخدامه في الدراسات البكتريولوجية لعزل وتحديد البكتيريا من جنس Klebsiella، وإنتاج الوسائط المغذية لهذه الدراسات.
تم الإعلان عن مجموعة من الاختراعات المتعلقة بصناعة الأغذية والتخمير: مزارع شاي فطريات الكمبوتشا، وMedusomyces gisevii alfa، وMedusomyces gisevii، بالإضافة إلى طريقة لإنتاج قاعدة متخمرة لإنتاج الكفاس، وطريقة لإنتاج ثقافة الكمبوتشا. سائل وطريقة لتحضير المشروبات من عصير الخضار أو الخضار المتخمرة.
يتعلق الاختراع بالتكنولوجيا الحيوية وعلم الأحياء الدقيقة والزراعة ويمكن استخدامه للحصول على مستحضر بكتيري ضد أمراض النبات التي تسببها الفطريات المسببة للأمراض النباتية من جنس Fusarium وMicrodochium وPyrenophora وPuccinia.تركيبة مناعية لعلاج أو الوقاية من المطثية العسيرة، طريقة لتحضيرها وطريقة لتحفيز الاستجابة المناعية لبكتيريا C. صعب // 2550271
يُقترح استخدام تركيبة مناعية للاستخدام في العلاج أو الوقاية من الأمراض المرتبطة ببكتيريا المطثية العسيرة، وهي طريقة لإنتاج مثل هذه التركيبة عن طريق خلط مكوناتها، وطريقة لتحفيز الاستجابة المناعية لبكتيريا المطثية العسيرة.
يتعلق الاختراع بمجال التكنولوجيا الحيوية. يتم ترسيب سلالة البكتيريا الدقيقة تحت رقم التسجيل BKM Ac-2615D، وتستخدم لتنقية المسطحات المائية المالحة والبحرية. يوفر الاختراع تدميرًا معززًا لأجزاء النفثينيك والمركبات الحلقية غير المتجانسة والراتنجات، بالإضافة إلى المركبات متعددة العطريات والبنزو(أ)بيرين والبنزو(أ)أنثراسين في الزيت. 1 مريض، 2 طاولات، 1 سابق.
وتتعلق مجموعة الاختراعات بالتكنولوجيا الحيوية. تحتوي خيارات الوسط المغذي للتراكم الانتقائي للبكتيريا المعوية على هيدروليزات البنكرياس من وجبة السمك، أو ببتون اللحوم، أو هيدروليزات البنكرياس من وجبة السمك وببتون اللحوم، والصفراء المعدلة المنقى، وكلوريد الصوديوم، والجلوكوز، وفوسفات البوتاسيوم الأحادي البديل والأخضر اللامع في نسبة معينة. تتيح الاختراعات زيادة كفاءة تراكم البكتيريا المعوية والخصائص الانتقائية للوسط وتبسيط طريقة الحصول على وسط غذائي. 3 ن. ملفات، 3 جداول، 9 صفحات.
قاعدة مرق بولتون للتخصيب
غاية
وسط الثقافة السائلة المستخدمة للعزل كامبيلوباكترمن عينات الأغذية طبقاً لمعايير ISO 10272-1:2006.
وصف
Bolton Broth Base عبارة عن مرق غني كامبيلوباكترمن عينات الطعام. عند معالجة وتخزين المنتجات الغذائية والخلايا كامبيلوباكترالتالفة، يمكن تحفيز تكاثرها ونموها عن طريق الحضانة المزدوجة في مرق بولتون.
يعتبر ماء ببتون اللحم وهيدروليزيت اللاكتالبومين مصدرين للكربون والنيتروجين الضروريين للنمو. يوفر كلوريد الصوديوم التوازن الأسموزي، وكربونات الصوديوم تحييد الحمض الذي يتكون أثناء نمو الكائنات الحية الدقيقة. يعمل مستخلص الخميرة وحمض الكيتوجلوتاريك كعوامل نمو. إن إدراج ميتابيسلفيت الصوديوم، بيروفات الصوديوم والهيمين يحيد المواد السامة التي يمكن أن تتشكل في وسط الاستزراع تحت تأثير الأكسجين، ويسمح لك بالاستغناء عن الجو الهوائي الدقيق. الدم المتحلل ضروري لتحييد مضادات ثلاثي الميثوبريم الموجودة في البيئة.
تم تحسين انتقائية خطوة التخصيب بواسطة مادة مضافة انتقائية (المادة 06-131-LYO): الفانكومايسين نشط ضد الكائنات الحية الدقيقة إيجابية الجرام. يعمل سيفوبيرازون بشكل رئيسي على البكتيريا سالبة الجرام. يعتبر تريميثوبريم فعالاً ضد نطاق واسع من الخلايا إيجابية الجرام وسالبة الجرام، كما أن سيكلوهكسيمايد أو الأمفوتيريسين ب من مبيدات الفطريات الفعالة.
تحضير
قم بإذابة 13.8 جم من المسحوق في 500 مل من الماء المقطر، وقم بتسخينه إذا لزم الأمر. تعقيم بواسطة التعقيم لمدة 15 دقيقة عند 121 درجة مئوية. يُبرد إلى 47-50 درجة مئوية، ويُضاف بشكل معقم 25 مل من دم الحصان المتحلل وزجاجة واحدة من المكمل الانتقائي كامبيلوباكتربولتون (المادة 06-131-LYO). اخلط جيدا. صب الوسط المحضر في الحاويات المناسبة.
ملحوظة:إذا تم تحضير مرق التخصيب مسبقًا، فيمكن تخزينه في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى 4 ساعات أو في الظلام عند درجة حرارة 3 ± 2 درجة مئوية لمدة تصل إلى 7 أيام.
تقنية البذر
تتم إضافة العينة إلى الوسط بكمية (بالوزن أو الحجم) تساوي تسعة أضعاف حجم مرق بولتون الانتقائي للتخصيب للحصول على عينة اختبار/نسبة متوسطة تبلغ 1:10 (وزن/حجم أو حجم/حجم) ومتجانسة .
لا يتطلب Bolton Selective Enrichment Broth حضانة هوائية دقيقة، ولكن يجب استخدامه في حاويات مثبتة بإحكام ومملوءة بمساحة رأس أقل من 20 مم في الأعلى.
احتضان المعلق الأولي عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 4-6 ساعات، ثم عند 41.5 درجة مئوية لمدة 44 ± 4 ساعات.
للتعرف على طرق العزل وتحديد الهوية، راجع ISO أو دليل التحليل البكتريولوجي (BAM).
تخزين
الوسيط مخصص للاستخدام المختبري فقط. قم بتخزين الوسيط في وعاء بغطاء مغلق بإحكام، في مكان مظلم وجاف وبارد (درجة حرارة تتراوح بين +4 درجة مئوية و30 درجة مئوية ورطوبة<60%)
رقابة جودة
