Селенитовый бульон — среда обогащения с селективными свойствами, предназначенная для выделения патогенной бактерий рода сальмонелла (лат. Salmonella). Она очень эффективна при необходимости обнаружить именно этот патогенный организм в числе других представителей кишечной микрофлоры. Среда используется как для клинической диагностики, так и в санитарных целях при проверке пищевых продуктов.
Общая характеристика
Селенитовый бульон готовится на основе порошка, представляющего собой гомогенизированную смесь различных компонентов состава. Цвет сухого материала может быть светло-желтым или кремовым, в зависимости от типа среды. Порошок обладает сыпучими свойствами.
Готовый селенитовый бульон представляет собой жидкую прозрачную среду светло-желтого цвета. Эта масса заливается в емкости, куда производится посев для дальнейшей инкубации.
Существует три основных вида селенитового бульона:
- среда в чистом виде — подходит для выделения сальмонелл как из клинического, так и из санитарного материала;
- с добавлением маннита (двухкомпонентный бульон) — предназначен для работы только с клиническим материалом;
- цистеин-селенитовая среда — может использоваться для выделения сальмонелл из патологического биоматериала пациента (кал, моча и др).
Эти типы немного отличаются компонентным составом и особенностями действия.
Основная задача селенитового бульона — способствовать накоплению сальмонелл, подавляя рост сопутствующей микрофлоры. Это дает возможность не только обнаружить патоген в материале, но и впоследствии пересеять его на агар. Среда была разработана Лейфлером, который первым обнаружил селективное действие селенита в отношении сальмонелл.
Состав
В состав селенитового бульона входят:
- гидролизат казеина;
- лактоза;
- фосфат натрия;
- гидроселенит натрия.
Селенит-цистеиновая среда, кроме этих компонентов, содержит L-цистеин и гидрофосфат натрия. Состав бульона с маннитом отличается тем, что вместо гидролизата казеина туда входит пептический перевар животной ткани. Лактоза в такой среде отсутствует, но зато есть маннит. Последний выступает в качестве ферментируемого субстрата и обеспечивает буферные свойства бульона.
Все компоненты порошка, кроме гидроселенита натрия, условно называют частью А, а селективное вещество — частью Б.
Принцип действия и свойства среды
Селенитовый бульон работает как накопительная среда с селективным действием. Избирательный эффект обеспечивается за счет токсичности селенита, который подавляет рост большинства микроорганизмов. При этом бактерии рода сальмонелла способны восстанавливать это соединение, тем самым устраняя токсический эффект для собственных клеток. Однако в результате реакции образуется щелочь, которая снижает пагубное влияние селенита на рост сопутствующей микрофлоры, в связи с чем возникает необходимость стабилизировать pH. Эту функцию выполняют бактерии, ферментирующие лактозу с образованием кислоты. Буферность среды обеспечивается фосфатом.
В двухкомпонентном бульоне pH стабилизируется за счет маннита. Среда с цистеином улучшает селективное действие в отношении сальмонелл. Такой бульон эффективен для контроля инфекционного фона у пациентов с неострой стадией заболевания или реконвалесцентов.
Проявление ростовых характеристик референтных штаммов в среде можно наблюдать по истечении 12-24 часов с момента начала инкубации. При этом сальмонеллы образуют бесцветные колонии.
Особенности приготовления
Приготовление среды осуществляют в два этапа. Вначале делают раствор с селективным компонентом из расчета 4 грамма селенита натрия на литр дистиллированной воды. Затем добавляют 19 грамм основного порошка (часть А). Раствор тщательно перемешивают и подогревают до полного растворения частиц, после чего заливают в стерильные пробирки.
При приготовлении важно следить за температурным режимом, поскольку среда неустойчива к перегреву. Стерилизацию бульона можно осуществлять только на водяной бане или же использовать струю пара. Автоклавирование среды категорически недопустимо.
Бульон для выделения энтерококков (энтерококкозель бульон) – обогатительная среда для выделения энтерококков из проб, содержащих многочисленную сопутствующую микрофлору. Многие микроорганизмы, такие как сапрофитные нейссерии, стафилококки, гемофилы, негемолитические стрептококки и некоторое количество энтеробактерий, ингибируются полностью или частично.
Казеиновый и соевый пептоны являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов. Декстроза – ферментируемый углевод, источник углерода и энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Цитрат натрия – дополнительный источник углерода. Азид натрия – ингибитор. Сульфит натрия при восстановлении образует H 2 S. L-цистин снижает окислительно-восстановительный потенциал за счет удаления кислорода, поддерживая низкое значение Eh. Кристаллический фиолетовый – индикатор pH.
Инокулировать и инкубировать 18−24 часа при 35°C в нормальной атмосфере. Рост энтерококков определяется по образованию гранулированного осадка на дне пробирки, причем находящаяся над ним жидкость – без осадка или слегка мутная. На этом этапе выполняется окрашивание по Граму и производится пересев штрихом на чашки с кровью (Агар триптиказеино-соевый (кат. № 1068) или Основа кровяного агара (кат. № 1108)) для определения типа гемолиза и выделения чистых культур. Для дифференциации стрептококков и пневмококков поместить диски с бацитрацином и оптохином в область посева на чашках с кровяным агаром и инкубировать в рекомендуемых условиях 18–24 часа при 35±2°C.
Провести окрашивание по Граму, каталазный тест и тест на растворимость в желчи с характерными колониями, взятыми из чашек с кровяным агаром или культурой, выросшей в бульоне.
Присутствие цепочек грамположительных кокков различной длины, ингибируемых бацитрацином в низкой концентрации, отрицательных по каталазе и нерастворимых в желчи или солях желчных кислот, является предварительной идентификацией бета-гемолитических стрептококков группы A. Окончательную идентификацию стрептококков можно осуществить с помощью других биохимических тестов, таких как гидролиз эскулина, гидролиз пирувата и т.п. Помимо этого можно провести серологическое типирование с использованием методов с антисыворотками по Лансфилду (Lancefield) или более традиционных методов коагглютинации по Эдвардсу и Ларсону (Edwards and Larson).
Микробиологический тест
Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при 35±2°C и наблюдались через 18–24 часа.
|
Микроорганизмы |
|
|
Escherichia coli ATCC 25922 |
Ингибируется |
|
Enterococcus faecalis ATCC 19433 |
|
|
Enterococcus faecium ATCC 27270 |
Основа селективного бульона Болтона -
Bolton Selective Enrichment Broth (Base) for microbiology
Кат. №1.00068.0500
Упаковка - 500 г
Селективный накопительный бульон Болтона для выявления Campylobacter
Принцип действия
Селективный бульон Болтона содержит питательные вещества, которые способствуют выявлению даже поврежденных клеток кампилобактера. Не требуется создание микроаэрофильных условий. Внесение в среду селективной добавки ингибирует рост сопутствующей грамположительной и грамотрицательной микрофлоры.
Состав (г/л)
Пептон из мяса 10,0; гидролизат лактальбумина 5,0; дрожжевой экстракт 5,0; хлорид натрия 5,0; кетоглутаровая кислота 1,0; пируват натрия 0,5; бисульфит натрия 0,5; карбонат натрия 0,6; гемин 0,01.
Приготовление
Растворить 13,8 г в 500 мл дистиллированной воды. Автоклавировать 15 мин при 121°С и охладить до 45°С. Добавить в асептических условиях 25 мл лизированной лошадиной крови и содержимое 1 флакона селективной добавки Bolton Broth Selective Supplement (Кат. N 1.00079.0001) к бульону Болтона. Тщательно перемешать и разлить бульон в стерильные флаконы с завинчивающимися крышками. После добавления образца свободный промежуток между завинчивающейся крышкой и уровнем бульона должен составлять приблизительно 2 см.
рН 7,4 ±0,2 при 25°С.
Готовая среда во флаконе имеет темно-красный или почти черный цвет.
Проведение анализа
Размешать 25 г образца в 225 мл селективного бульона Болтона и инкубировать на протяжении 4 часов при температуре 37°С.
Затем продолжить инкубацию при температуре 41,5°С на протяжении 14-44 часов.
Сделать пересев через 18 часов и 48 часов соответственно на Campylobacter Blood Free Selective Agar селективном агаре (Кат.№ 1.00070.0500), который не содержит кровь.
Прямой скрининг на наличие Campylobacter jejuni и c oli проводят с использованием экспресс-тестов Singlepath ® Campylobacter (Кат.№1.04143.0001).
Контроль качества.
Владельцы патента RU 2553224:
Группа изобретений относится к биотехнологии. Варианты питательной среды для селективного накопления энтеробактерий содержат панкреатический гидролизат рыбной муки, либо пептон мясной, либо панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной (в соотношении 1:1), желчь очищенную модифицированную (ЖОМ), натрий хлористый, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый в заданном соотношении. Изобретения позволяют повысить эффективность накопления энтеробактерий, селективные свойства среды и упростить способ получения питательной среды. 3 н.п. ф-лы, 3 табл., 9 пр.
Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии и может быть использовано для селективного накопления энтеробактерий из воды, пищевых продуктов, клинического материала и т.д.
Ведущие зарубежные фирмы: Merck «Микробиология», 2004-2005 стр.202; HiMedia (HiMedia Laboratories Pvt. Limited (Индия), 1993, стр.80; и ООО «ГЕМ» «Среды бактериологические». Каталог 2009-2010, стр.48, выпускают накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю на основе панкреатического гидролизата желатина или пептона мясного. Компонентное содержание в г/л представлено в табл.1.
Для бактериологического контроля в соответствии с Государственной Фармакопеей Российской Федерации, XII издание, регламентирующей перечень питательных сред для селективного обогащения энтеробактерий, предусмотрен бульон Мосселя (Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel) ОФС 42-0067-07.
Селективное накопление всех видов энтеробактерий в бульоне Мосселя обусловлено тем, что высокая концентрация бычьей желчи в совокупности с бриллиантовым зеленым подавляет рост сопутствующей микрофлоры, а глюкоза способствует росту энтеробактерий. Натриево-калийные фосфаты обеспечивают большую буферную емкость в среде, что защищает культуру от губительного действия образующейся кислоты.
До настоящего времени в России в связи с отсутствием отечественной коммерческой сухой питательной среды для селективного обогащения энтеробактерий в практике клинической и санитарной микробиологии используется бульон Мосселя лабораторного приготовления, а для контроля микробиологической чистоты лекарственных сред - среда №3 (среда обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae).
Недостатками бульона Мосселя лабораторного изготовления в соответствии с рецептурой, представленной в ГФ, XII издание, и среды №3 являются:
Сложность приготовления;
Использование в качестве элективного фактора неочищенной желчи крупного рогатого скота - вещества химически неопределенного состава, затрудняющего получение объективных результатов;
Отсутствие отечественных сухих препаратов - пептона и желчи, обладающих высокой степенью прозрачности в растворах;
Необходимость фильтрации в случае использования основных компонентов среды отечественного производства, как дополнительный этап в процессе приготовления;
Слабая ингибирующая способность в отношении сопутствующих грамположительных микробов ассоциантов при обеспечении роста энтеробактерий;
Увеличение себестоимости среды в случае необходимости использования импортных препаратов.
Наиболее близким к предлагаемому бульону Мосселя является коммерческий бульон Мосселя (Merck), который состоит из следующих компонентов, г/л:
Недостатком коммерческой среды (Merck) является:
Недостаточная эффективность при росте и селективном накоплении ряда энтеробактерий;
Недостаточно выраженные ингибирующие свойства в отношении микробов-ассоциантов;
Ограниченная доступность.
Задачей изобретения является создание отечественной сухой питательной среды для селективного накопления энтеробактерий, обладающей большей эффективностью, с более высокими селективными свойствами, обеспечивающей доступность и получение объективных результатов бактериологического контроля.
Поставленная задача решается тем, что предлагается питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая, содержащая белковую основу, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, причем в качестве белковой основы она содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, либо пептон мясной, либо панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной (в соотношении 1:1), желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Вариант первый:
Вариант второй:
Вариант третий:
Технический результат достигается за счет предварительной подготовки сырой желчи. С этой целью нативную желчь КРС кипятят и фильтруют через фильтровальную ткань (бельтинг) в изоэлектрических точках, при каждом значении pH, с целью осаждения белков и высокомолекулярных пептидов. Заключительный этап подготовки желчи состоит из адсорбции примесей активным углем, внесения расчетного количества двузамещенного фосфата натрия в пересчете на содержание сухих веществ, кипячения и фильтрации. Это позволяет исключить дополнительное внесение фосфата натрия в состав среды, обеспечивая высокую буферную емкость готовой среды и ее прозрачность. Сбалансированность компонентного состава среды, включая панкреатический гидролизат рыбной муки (ПГРМ), в качестве белковой питательной основы, обеспечивает хорошие ростовые и селективные свойства бульона Мосселя.
Способ получения бульона Мосселя предусматривает смешивание сухих компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбной муки или пептон мясной обеспечивают ростовые потребности микроорганизмов в азотистом питании. Предварительная подготовка желчи КРС позволяет получить сухую желчь очищенную модифицированную (ЖОМ), обеспечивающую высокую буферную емкость и прозрачность готовой питательной среды, ингибирующие свойства в отношении нежелательной сопутствующей бактериальной флоры и селективное накопление энтеробактерий, не угнетаемое в результате образования кислых продуктов жизнедеятельности.
Отличием предлагаемой среды от прототипа является возможность использования наряду с пептоном мясным панкреатического гидролизата рыбной муки в качестве белковой основы. Технология подготовки сырой желчи с использованием натрия фосфорнокислого двузамещенного исключает дополнительное внесение его в среду. Количественное соотношение компонентов питательной среды, ее pH, обеспечивают среде сохранение хороших ростовых свойств, эффективность накопления энтеробактерий и ингибирующий эффект в отношении сопутствующей микрофлоры. Готовая среда сохраняет стерильность не менее 10 суток
Для достижения технического результата на стадии производства желчи очищенной модифицированной (ЖОМ) желчь после осаждения белков в изоэлектрических точках, адсорбции примесей активным углем с внесением двузамещенного фосфата натрия из расчета 12,0 г на каждые 20,0 г желчи, в пересчете на сухое вещество, сушат на сушильной установке в виброкипящем слое А1-ФМУ.
Пример 1. Для приготовления среды по первому варианту берут навески следующих ингредиентов, г/л:
Предлагаемая среда, прозрачная, зеленого цвета, обеспечивает рост и накопление следующих тест-штаммов семейства Enterobacteriaceae при посеве по 0,5 мл микробной взвеси из разведения 10 -7:
E. coli O55:K59 3912/41
S. flexneri 1a 8516
S. typhimurium 79
K. pneumonia 418
K. pneumonia 3534/51
Предлагаемая среда в значительной степени ингибирует рост грамположительных микроорганизмов, в частности S. aureus Wood-46, из разведения 10 -1 .
Используемые для контроля среды тест-штаммы микроорганизмов получены из отдела коллекционных культур ФБУН ГНЦ ПМБ.
Готовят стандартную взвесь культуры каждого тест-штамма, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П, с использованием стерильного 0,9% раствора натрия хлористого. Полученные взвеси культур десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида с 0,5 мл микробной взвеси) доводят до разведения 10 -7 (для S. aureus Wood-46 - до разведения 10 -1) и используют для контроля среды.
Для определения ростовых свойств засев производят по 0,5 мл микробной взвеси каждого из тест-штаммов из разведения 10 -7 в 5,0 мл бульона Мосселя, т.е. 10 м.к./мл среды. Посевы инкубировали при температуре (37±1)°C в течение 20-24 ч. Результаты биологического контроля лабораторных образцов бульона Мосселя на наборе тест-штаммов представлены в таблице 2.
Пример 2. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Пример 3. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 2 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.
Пример 4. Для приготовления бульона Мосселя в соответствии со вторым вариантом берут навески следующих ингредиентов, г/л:
Навески размешивают в 1 л дистиллированной воды, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют автоклавированием при температуре 121°C в течение 5 мин.
Пример 5. Среду готовят в соответствии с примером 4.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки примеров 1, 2, 3 по варианту 1.
Пример 6. Для приготовления бульона Мосселя в соответствии с третьим вариантом берут навески следующих ингредиентов, г/л:
Навески размешивают в 1 л дистиллированной воды, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют автоклавированием при температуре 121°C в течение 5 мин.
Результаты биологического контроля бульона Мосселя в соответствии с вариантом 3 представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примерам 1, 2, 3.
Пример 7. Среду готовят в соответствии с примером 6.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 3 и аналогичны результатам проверки по примерам 1, 2, 3.
Пример 8. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 2.
Оценка качества предлагаемой среды для селективного накопления энтеробактерий с нарушением количественного соотношения ингредиентов:
Пример 9. Среду готовят в соответствии с примером 1.
Результаты биологического контроля представлены в таблице 2. Нарушение количественного соотношения ингредиентов среды в примерах 8, 9 ведет к ухудшению ростовых, ингибирующих свойств и, как следствие, снижению коэффициента эффективности накопления энтеробактерий.
Из таблиц сравнительных характеристик биологического контроля (табл.2, 3) видно, что предлагаемая питательная среда в соответствии с примерами 1-7 обладает хорошими ростовыми свойствами, эффективна в накоплении энтеробактерий и подавляет рост стафилококка.
Визуальный учет результатов накопления энтеробактерий по окончании срока инкубации посевов показал идентичные результаты в испытуемых и контрольной средах.
Изменение количественного соотношения компонентов среды ведет к нарушению биологических показателей качества предложенной среды.
Так, в случае приготовления среды в соответствии с примерами 8, 9 наблюдается снижение эффективности накопления энтеробактерий и ингибирующего эффекта среды в отношении S. aureus Wood-46.
Для получения данных по показателю эффективности бульона Мосселя засеянные пробирки каждого тест-штамма, содержащие около 10 м.к./мл - (нулевой посев) инкубировали при температуре (37±1)°C в течение 3 ч. Для определения посевной дозы 0,1 мл микробной взвеси каждого тест-штамма из разведения 10 -7 высевали на чашки Петри с ГРМ агаром. После инкубации посевов в накопительной среде содержимое пробирок перемешивали и производили аналогичный высев на ГРМ агар.
Через 18-20 часов инкубации посевов на ГРМ агаре при температуре (37±1)°C производили подсчет сформировавшихся колоний. Показатель эффективности рассчитывали по приросту числа колоний после инкубации культуры в накопительной среде к числу колоний при нулевом посеве.
Сравнительная характеристика эффективности бульона Мосселя по варианту 1 представлена в таблице 3. Результаты эффективности накопления энтеробактерий бульона Мосселя, приготовленного в соответствии вариантами 2, и аналогичны и сопоставимы с результатами, полученными при испытании бульона Мосселя, вариант 1.
Таким образом, разработана отечественная конкурентоспособная сухая питательная среда для селективного обогащения энтеробактерий, имеющая ряд преимуществ:
эффективность накопления энтеробактерий в 1,5-2,0 раза выше, чем в коммерческой среде;
коэффициент ингибиции в отношении стафилококка более чем в 100 раз превышает показатель коммерческого накопительного бульона;
питательная среда проста в приготовлении;
разработана технология осветления желчи в изоэлектрических точках с использованием активного угля и двузамещенного фосфата натрия, исключающая дальнейшее внесение его в питательную среду, обеспечивающая прозрачность готового препарата;
исключена необходимость использования безводного натрия фосфорнокислого двузамещенного при изготовлении сухого препарата;
возможность использования панкреатического гидролизата рыбной муки наряду с пептоном мясным при сохранении ростовых и селективных свойств;
| Таблица 1 | |||||
| Накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю | |||||
| № п/п | Наименование компонентов | ЭО бульон Мосселя ЕЕ Broth, Mossel HiMedia | Энтеробактериальный бульон обогащения по Мосселю ООО «ГЕМ» | Бульон Мосселя для обогащения энтеробактрий (Enterobacteria Erichment Broth-Mossel ОФС 42-0067-07) | |
| 1 | Панкреатический гидролизат желатина | - | - | 10,0 | 10,0 |
| 2 | Пептон мясной | 10,0 | 10,0 | - | - |
| 3 | Глюкоза моногидрат | 5,5 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
| 4 | Желчь бычья | 20,0 | 20,0 | 20,0 | 20,0 |
| 5 | Натрий фосфорнокислый двузамещенный | 8,0 | 6,45 | 7,0 | 8,0 |
| 6 | Калий фосфорнокислый однозамещенный | 2,0 | 2,0 | 3,0 | 2,0 |
| 7 | Бриллиантовый зеленый | 0,015 | 0,0135 | 0,015 | 0,015 |
| pH готовый среды | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 |
| Таблица 2 | ||||||||
| Сравнительная характеристика биологического контроля бульона Мосселя на основе панкреатического гидролизата рыбной муки, г/л | ||||||||
| № п/п | Наименование тест-штамма | Разведение | Вариант 1 | Вариант 1 | Вариант 1 | Вариант 1 | Вариант 1 | Накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю (Бульон Мосселя) Merck |
| Пример 1 | Пример 2 | Пример 3 | Пример 8 | Пример 9 | ||||
| 1 | E. coli 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 2 | E. coli 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ осадок |
| 3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| 3 | S. flexneri la 8516 | 10 -7 | ++ | ++ | ++ | + | + | ++ |
| 10 -6 | ++ | ++ | ++ | ++ | + | +++ | ||
| 4 | S. typhimurium 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ | ||
| 5 | K. pneumonia | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 418 | 10- 6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ газ | |
| 6 | S. aureus-Wood-46 | 10 -1 | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | + слабое диффузное помутнение среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | |
| Таблица 3 | |||||||
| Сравнительная характеристика биологического контроля бульона Мосселя на основе мясного пептона и смеси ПГРМ с мясным пептоном в соотношении 1:1, г/л | |||||||
| № п/п | Наименование тест-штамма | Разведение | Вариант 2 | Вариант 2 | Вариант 3 | Вариант 3 | Накопительный бульон для энтеробактерий по Мосселю (Бульон Мосселя) Merck |
| Пример 4 | Пример 5 | Пример 6 | Пример 7 | ||||
| 1 | E. coli 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 2 | E. coli 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++осадок |
| 3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| 3 | S. flexneri la 8516 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 4 | S. typhimurium 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 5 | K. pneumonia | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 418 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++газ | |
| 6 | S. aureus-Wood-46 | 10 -1 | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды | Нет диффузного помутнения среды |
| *+++ - отличный рост с диффузным помутнением среды; ++ - хороший рост с диффузным помутнением среды; |
1. Питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая (Бульон Мосселя), содержащая белковую основу, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, дополнительно содержит желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
2. Питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая (Бульон Мосселя), содержащая пептон мясной, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, отличающаяся тем, что она содержит желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
3. Питательная среда для селективного накопления энтеробактерий, сухая (Бульон Мосселя), содержащая белковую основу, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы содержит панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной в соотношении 1:1, дополнительно содержит желчь очищенную модифицированную (ЖОМ) и натрий хлористый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Похожие патенты:
Изобретение касается набора олигонуклеотидных праймеров и зондов для идентификации и субтипирования ДНК бактерии Pasteurella multocida серотипов А, B, D, E, F методом ПЦР в режиме реального времени.
Изобретение касается набора флуоресцентно-меченых олигонуклеотидных зондов для типирования штаммов Burkholderia mallei. Входящие в состав набора зонды имеют структуру «шпильки» с флуорофором и гасителем флуоресценции на концах и обладают комплементарностью к продуктам реакции амплификации с праймерами.
Изобретение относится к пищевой микробиологии, в частности к получению питательной среды для определения в кондитерских изделиях, микроорганизмов, вырабатывающих липазы.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления продуцирующих уреазу микроорганизмов, в частности Helicobacter pylori. Для этого проводят экспресс-анализ на диагностических дисках для определения уреазной активности образцов.
Группа изобретений относится к биохимии. Предложен способ получения стандартного образца мутности бактерийных взвесей, стандартный образец мутности бактерийных взвесей, применение стандартного образца мутности бактерийных взвесей, а также набор, содержащий стандартный образец мутности бактерийных взвесей.
Представлены наборы олигонуклеотидных зондов и праймеров, биологический микрочип и тест-система для идентификации и типирования вируса гриппа А и В. Охарактеризованная тест-система содержит: набор реагентов для выделения РНК вируса гриппа из биологического материала человека; набор реагентов для проведения ПЦР-амплификации, совмещенной с обратной транскрипцией, с образованием флуоресцентно-меченных фрагментов генома вируса гриппа, содержащий описанные олигонуклеотиды-праймеры; набор реагентов для проведения гибридизации фрагментов ДНК, полученных после проведения амплификации на биочипе, содержащем элементы с иммобилизованными описанными олигонуклеотидными зондами; и при необходимости, отрицательный и положительный контрольные образцы.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к определению содержания микроорганизмов в различных объектах и средах. Способ предусматривает конъюгацию бактерий с электрохимической меткой, в качестве которой используют Fe0, MgFe2O4 или Fe3O4, осуществляемую в водной среде при заданных параметрах.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и биотехнологии, в частности к микробиологической лабораторной диагностике инфекционных болезней. Питательная среда содержит триптон, дрожжевой экстракт, глюкозу, хлорид натрия, эритроциты человека 0(I) группы Rh(+), сульфат железа(II), агар «Дифко» и дистиллированную воду при заданных соотношениях компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при бактериологических исследованиях по выделению и идентификации бактерий рода Klebsiella, производстве питательных сред для этих исследований.
Заявлена группа изобретений, относящихся к пищевой и бродильной промышленности: культуры чайного гриба Fungi Tea, Medusomyces gisevii alfa и Medusomyces gisevii, а также способ получения сброженной основы для производства кваса, способ получения культуральной жидкости чайного гриба и способ получения напитков из овощного сока или сброженных овощей.
Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и сельскому хозяйству и может быть использовано для получения бактериального препарата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами рода Fusarium, Microdochium, Pyrenophora и Puccinia. Иммуногенная композиция для лечения или профилактики clostridium difficile, способ ее получения и способ индукции иммунного ответа к c. difficile // 2550271
Предложены иммуногенная композиция для применения при лечении или профилактике заболеваний, связанных с Clostridium difficile, способ получения такой композиции, путем смешивания входящих в ее состав ингредиентов и способ индуцирования иммунного ответа к C.
Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Microbacterium species депонирован под регистрационным номером BKM Ac-2615D, применяемый для очистки солоноватоводных и морских водоемов. Изобретение обеспечивает усиление разрушения в нефти нафтеновых фракций, гетероциклических соединений и смол, а также полиароматических соединений, бензо(а)пирена бензо(а)антрацена. 1 ил., 2 табл., 1 пр.
Группа изобретений относится к биотехнологии. Варианты питательной среды для селективного накопления энтеробактерий содержат панкреатический гидролизат рыбной муки, либо пептон мясной, либо панкреатический гидролизат рыбной муки и пептон мясной, желчь очищенную модифицированную, натрий хлористый, глюкозу, калий фосфорнокислый однозамещенный и бриллиантовый зеленый в заданном соотношении. Изобретения позволяют повысить эффективность накопления энтеробактерий, селективные свойства среды и упростить способ получения питательной среды. 3 н.п. ф-лы, 3 табл., 9 пр.
Bolton Enrichment Broth Base
Назначение
Жидкая культуральная среда, используемая для выделения Campylobacter из пищевых образцов, согласно стандартам ISO 10272-1:2006.
Описание
Основа бульона Bolton - обогатительный бульон для Campylobacter из проб пищевых продуктов. При обработке и хранении продуктов питания клетки Campylobacter повреждаются, их размножение и рост могут быть простимулированы двойной инкубацией в бульоне Болтона.
Мясная пептонная вода и гидролизат лактальбумина являются источниками необходимых для роста углерода и азота. Хлористый натрий обеспечивает осмотический баланс, а карбонат натрия нейтрализует кислоту, образующуюся при росте микроорганизмов. Дрожжевой экстракт и кетоглутаровая кислота действуют как факторы роста. Включение метабисульфита натрия, пирувата натрия и гемина нейтрализует токсические субстанции, которые могут образовываться в культуральной среде под действием кислорода, и позволяют обходиться без микроаэробной атмосферы. Лизированная кровь необходима для нейтрализации присутствующих в среде антагонистов триметоприма.
Селективность этапа обогащения оптимизируется селективной добавкой (Артикул 06-131-LYO): ванкомицин активен в отношении грамположительных микроорганизмов. Цефоперазон в основном действует на грамотрицательные бактерии. Триметоприм эффективен в отношении широкого круга грамположительных и грамотрицательных клеток, а циклогексимид или амфотерицин В являются эффективными фунгицидами.
Приготовление
Растворить 13,8 г порошка в 500 мл дистиллированной воды, при необходимости нагреть. Стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. Остудить до 47-50°C, асептически добавить 25 мл лизированной лошадиной крови и 1 флакон Селективная добавки Campylobacter Bolton (Артикул 06-131-LYO). Хорошо смешать. Приготовленную среду разлить в соответствующие контейнеры.
Примечание: Если бульон для обогащения приготовлен заранее, его можно хранить при комнатной температуре не более 4 часов или в темноте при температуре 3 ± 2°C не более 7 дней.
Техника посева
Образец вносят в среду в количестве (по массе или объему), в девять раз меньшем объема селективного обогатительного бульона Bolton, чтобы получить соотношение тестируемый образец/среда 1:10 (в/о или о/о), и гомогенизируют.
Селективный бульон для обогащения Bolton не требует инкубации в микроаэробных условиях, но должен применяться в плотно завинчивающихся контейнерах, заполненных так, чтобы сверху оставалось свободное пространство высотой менее 20 мм.
Инкубируют исходную суспензию при температуре 37°C в течение 4-6 часов, затем при 41,5°C в течение 44 ± 4 часов.
Методы выделения и идентификации см. в ISO или Руководстве по бактериологическому анализу (BAM).
Хранение
Среда предназначена только для использования в лабораториях. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности <60%)
Контроль качества
